MembraGuard digestive Solution

StemGrowth series 消化液

1、 产品描述

StemGrowth series MembraGuard Digestive Solution 是一种基于化学螯合原理的无酶细胞解离液，专为胚胎干细胞（ESC）和诱导多能干细胞（iPSC）设计。其核心机制是利用主要螯合剂乙二酸化合物解离细胞间隙连接。该溶液补充了碳酸氢盐、葡萄糖和Hepes构成缓冲系统以维持稳定pH，并添加氯化钾、氯化钠等离子调节渗透压，使其高度模拟胚胎内环境。此优化配方可在5至8分钟内高效完成ESC或iPSCs的温和解离、消化及传代所需的细胞团块处理。

2、 产品信息

3、 使用说明

StemGrowth series MembraGuard digestive Solution 请勿于-20摄氏度上冻。

注意事项：在使用时应始终穿戴防护服，在处理诸如人体细胞或其他生物及有害物质时应遵循安全的实验室规程。

1、   PSC传代条件：

细胞汇合度达85%左右，一般情况下每4-8天传代；

细胞汇合度较低，生长密度分布不均匀情况下请评估状态在传代。

注：即使克隆团较小、汇合度不足，也建议不要连续培养超过10天。

2、   传代比例：可根据细胞生长状态和实验需要按1:6~1:12的比例进行传代，如果细胞正常，克隆团汇合度85%，大小均匀，建议按照1:12进行传代，如果密度偏低，则可降低传代比例；密度偏高，则增加传代比例。

注：1:12传代就是1个孔瓶传12个孔（以6孔板为例）。

3、   将 Matrigel 包被的6孔板，提前放置培养箱中约1小时（~37℃）。 

4、   根据传代接种的孔数准备2 mL/孔的StemGrowth多能干细胞金牌培养基，并按1：1000比例加入StemGrowth series 抗胁迫补充剂，恢复至室温（~25℃）。

5、   将孔内培养基吸取，加入2 mL/孔的DPBS（不含钙镁），轻轻摇晃并吸取。

6、   加入2 mL/孔的 StemGrowth series消化液 使溶液完全覆盖孔底。

7、   置于37℃培养箱中孵育5-7 min。

注：① 消化5 min后镜下观察细胞变化，当大部分细胞变亮变圆，且细胞尚未脱离基质或漂起时即可终止消化，若大部分细胞仍未变亮，则需要延长消化时间；② 保持6孔板与培养箱金属隔板直接接触，使6孔板受热均匀，不要叠放。

8、   消化结束后轻轻地将细胞培养板拿回生物安全柜，避免震荡摇晃细胞，倾斜并吸除 StemGrowth series消化液。

9、   及时加入1 -2mL/孔预温的StemGrowth多能干细胞金牌培养基+1X StemGrowth series 抗胁迫补充剂，轻柔吹打小于3下使下细胞脱落。有部分细胞（10%～15%）未脱离基质是正常现象。

10、 吸取6孔板中的Matrigel溶液，加入预温的StemGrowth多能干细胞金牌培养基+1 X StemGrowth series 抗胁迫补充剂 2 mL/孔。

11、 在6孔板上标记细胞名称、代次、传代比例、日期、操作人。将步骤9获得的细胞悬液轻轻摇匀，按预先设定的传代比例均匀分配于孔板中。 

注：为了铺板均匀并降低对细胞的损伤，可以将步骤9获得的细胞悬液收集至1.5mL离心管，轻柔颠倒混匀细胞1-2次；再按照传代比例接种。

12、 12. 接种后，水平十字摇匀6孔板三次，置于37℃，5% CO2浓度，饱和湿度的培养箱中， 再次水平十字摇匀6孔板三次，培养过夜。

13、 13. 18-24小时后更换新StemGrowth多能干细胞金牌培养基，此后每天换液，4-8天后继续传代/冻存。

表1：hESC/iPSC传代&培养操作试剂推荐用量

V1.1版

更新时间：2025/06/23