产品描述
StemGrowth UniMediX GoldenHold Medium为新一代无饲养层、化学成分明确的多能干细胞（PSC）专用培养基，基于国际标准mTeSR体系优化开发，适用于人胚胎干细胞（hESC）及诱导多能干细胞（hiPSC）的长期未分化增殖培养。本体系补充氨基酸结构修饰的bFGF/FGF-G3、pro-TGF-β1和LR3IGF等高活性因子，通过精准调控细胞内外信号通路，维持PSC的自我更新与多能性正常表达。
产品信息
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产品名称 |
产品货号 |
试剂盒组分 |
规格 |
储存/运输 |
保质期 |
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StemGrowth series多能干细胞金牌培养基 |
ML-0827S04 |
StemGrowth UniMediX GoldenHold Medium |
500ml |
-20℃ |
24个月 |
其他自备试剂
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英文名称 |
产品名称 |
产品货号 |
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Mogengel Matrix IPSC Level |
干细胞金牌基质胶 |
082777 |
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Softase Digestion Solution |
StemGrowth series水解酶温和消化液 |
ML-0827S03 |
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MembraGuard digestive Solution |
StemGrowth series消化液 |
ML-0827S08 |
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StemstreesGuard supplement 1000x |
StemGrowth series抗胁迫补充剂 1000x |
ML-0827S10 |
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StemFreez Alive Solution |
StemFreez 无蛋白干细胞冻存液 |
ML-0827S129 |
Mogengel推荐用细胞系
H1、H9、HN4、iPSCs帕金森患者来源DY043、iPSC-EGFP等。
渗透压
300-340 OSM
新手须知
StemGrowth UniMediX GoldenHold Medium 可和mTeSR及mTeSR plus、E8等体系快速转化，对于先前培养于上述体系的细胞建议使用原体系复苏至密度80%后进行传代，传代P2的第一天培养基已原培养体系Medium:StemGrowth 1:1并补充1x StemGrowth series 抗胁迫补充剂，第二天完全转化为StemGrowth不含StemGrowth series 抗胁迫补充剂，继续培养至P3即可适应StenGrowth体系的日常培养、维护、扩增、冻存。
Ø 具体步骤如下：
阶段一：细胞复苏与传代准备
复苏与预培养：采用原培养体系（如mTeSR/mTeSR Plus/E8）复苏细胞，待细胞密度达80%时进行首次传代（P1）。
基质包被：使用干细胞金牌基质胶预处理培养皿，优化细胞贴附效率。
阶段二：细胞复苏与传代准备
首日过渡：传代后第1天，培养基按 原体系 : StemGrowth = 1:1 混合，并添加 1×StemGrowth series 抗胁迫补充剂（含多胺含抗坏血酸含Rho-i），维持细胞存活与克隆完整性。
次日完全转化：第2天更换为 100% StemGrowth基础培养基（不含StemGrowth series 抗胁迫补充剂），持续培养至细胞密度达80-90%。
阶段三：细胞复苏与传代准备
采用纯StemGrowth培养基进行常规传代、扩增及冻存，每日换液（2 mL/孔，6孔板），建议传代周期为3-4天。
注意事项：在使用时应始终穿戴防护服，在处理诸如人体细胞或其他生物及有害物质时应遵循安全的实验室规程。
仅用于科学研究。
30% 50% 80%
实验前建议
产品是无菌的，产品外包装是非无菌的，请在使用前对产品外包装充分消毒。
产品一经拆封，应妥善存放以确保产品的无菌性。
使用说明
Ø 1、Matrigel铺板（以货号为082777的干细胞金牌基质胶包被6孔板为例）
A、分装Matrigel
1. 货号082777的Matrigel，操作说明中不标注蛋白浓度，而是以Dilution Factor表示，如某批次的推荐Dilution Factor为400 μL，则表明400μL可包被4块6孔板，分装数量=5 mL /400=12。
2. 准备12个无菌1.5 mL EP管，标记Matrigel日期、操作人；1mL无菌吸头；EP管架，均置于-20℃冰箱中预冷1小时。
3. 将Matrigel放置4℃冰箱过夜解冻，当Matrigel完全解冻即可开始分装。
注：在解冻时，将Matrigel放置冰箱内侧角落，切勿放在靠近冰箱门附近。
4. 准备一个装满碎冰的冰盒，将解冻过的Matrigel、预冷的1.5 mL EP管及EP管架、1mL吸头放置于生物安全柜上。
5. 混匀Matrigel，无菌分装于各个1.5 mL EP管中，并置于冰上。当吸头被堵塞可能导致分装体积不准时需要更换吸头。
6. 将分装后的 Matrigel 置于-20℃冰箱中保存。
B、铺板
1. 取36 mL冷藏DMEM/F12或者Rhoi Free铺板液于50 mL离心管中，准备4个6孔板与-20度预冷过夜，标记Matrigel、批号、日期和操作人。
2. 1 mL无菌吸头置于-20℃冰箱中预冷1小时，取出一支冷冻的Matrigel（400uL）置于4℃冰箱解冻至完全化冻。
3. 准备一个装满碎冰的冰盒，将解冻过的Matrigel、预冷的1mL吸头放置于生物安全柜上。
4. 用预冷吸头向解冻过的Matrigel（5mL）加入1 mL冷的DMEM/F12并反复吹打解冻混匀。
5. 吸出已解冻混匀的Matrigel加入离心管中剩余的DMEM/F12，使用10 mL移液管再次反复吹打混匀。
6. 分装1.5 mL/孔于4个六孔板中，轻轻摇晃混匀。
7. 培养板置于37°凝胶1小时后即可使用，或置于4℃冷藏过夜，两周内使用。
Ø 2、复苏hESC/iPSC（以6孔板为例）
1. 将水浴锅预热至37℃；并将Matrigel包被的6孔板，提前放置培养箱中约1小时恢复至室温（15~30℃）。
2. 取4 mL StemGrowth多能干细胞金牌培养基，按照1:1000比例加入4 μL的1xStemGrowth series 抗胁迫补充剂 ，恢复至室温（15~30℃）。
注意：不要在37℃水浴锅中预温培养基。
3. 取出1支冷冻的细胞置于37℃水浴锅手持轻轻摇晃，2 min内解冻，肉眼观察细胞悬液内冰晶即将完全消失时取出。
4. 75%酒精无尘纸擦拭冻存管表面，转入生物安全柜；将细胞悬液移到事先准备好的15 mL 离心管中，随后缓慢逐滴加入10mL DMEM/F12，过程中轻柔晃动混匀细胞，160g离心5 min。
5. 吸弃上清，加入预温的4 mL的StemGrowth多能干细胞金牌培养基+1X StemGrowth series 抗胁迫补充剂制备细胞悬液，尽量避免吹打。
注：离心后可留200 μL上清液，轻弹管底，使细胞悬浮液更均匀，避免成较大细胞团。
6. 吸除6孔板中2孔的Matrigel包被液，将细胞悬液按照2 mL/孔接种到1个孔中。
7. 水平十字摇匀三次，置于37℃，5% CO2浓度，饱和湿度的培养箱中，再次水平十字摇匀三次培养。
8. 18-24小时后换新的StemGrowth多能干细胞金牌培养基，之后每天更换培养基。
注：在hPSC培养过程中，如果细胞的汇合度超过50%，建议更换培养基时，培养基的体积增加至3-4mL/孔。
Ø 3、传代hESC/iPSC（以6孔板为例）
1. 传代条件：
① 细胞汇合度达85%左右，一般情况下每4-8天传代；
② 细胞汇合度较低，生长密度分布不均匀情况下请评估状态在传代。
注：即使克隆团较小、汇合度不足，也建议不要连续培养超过10天。
2. 传代比例：可根据细胞生长状态和实验需要按1:6~1:12的比例进行传代，如果细胞正常，克隆团汇合度85%，大小均匀，建议按照1:12进行传代，如果密度偏低，则可降低传代比例；密度偏高，则增加传代比例。
注：1:12传代就是1个孔瓶传12个孔（以6孔板为例）。
3. 将 Matrigel 包被的6孔板，提前放置培养箱中约1小时（~37℃）。
4. 根据传代接种的孔数准备2 mL/孔的StemGrowth多能干细胞金牌培养基，并按1：1000比例加入StemGrowth series 抗胁迫补充剂，恢复至室温（~25℃）。
5. 将孔内培养基吸取，加入2 mL/孔的DPBS（不含钙镁），轻轻摇晃并吸取。
6. 加入2 mL/孔的 StemGrowth series消化液 使溶液完全覆盖孔底。
7. 置于37℃培养箱中孵育5-7 min。
注：① 消化5 min后镜下观察细胞变化，当大部分细胞变亮变圆，且细胞尚未脱离基质或漂起时即可终止消化，若大部分细胞仍未变亮，则需要延长消化时间；
② 保持6孔板与培养箱金属隔板直接接触，使6孔板受热均匀，不要叠放。
8. 消化结束后轻轻地将细胞培养板拿回生物安全柜，避免震荡摇晃细胞，倾斜并吸除 StemGrowth series消化液。
9. 及时加入1 -2mL/孔预温的StemGrowth多能干细胞金牌培养基+1X StemGrowth series 抗胁迫补充剂，轻柔吹打小于3下使下细胞脱落。有部分细胞（10%～15%）未脱离基质是正常现象。
10. 吸取6孔板中的Matrigel溶液，加入预温的StemGrowth多能干细胞金牌培养基+1 X StemGrowth series 抗胁迫补充剂 2 mL/孔。
11. 在6孔板上标记细胞名称、代次、传代比例、日期、操作人。将步骤9获得的细胞悬液轻轻摇匀，按预先设定的传代比例均匀分配于孔板中。
注：为了铺板均匀并降低对细胞的损伤，可以将步骤9获得的细胞悬液收集至1.5mL离心管，轻柔颠倒混匀细胞1-2次；再按照传代比例接种。
12. 接种后，水平十字摇匀6孔板三次，置于37℃，5% CO2浓度，饱和湿度的培养箱中， 再次水平十字摇匀6孔板三次，培养过夜。
13. 18-24小时后更换新StemGrowth多能干细胞金牌培养基，此后每天换液，4-8天后继续传代/冻存。
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培养容器 （孔数）/复苏比例 |
底面积 |
细胞悬浮液 （uL） |
传代工作液 |
hPSC培养基* |
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6孔板（1管 / 2孔） |
9.6 cm2/孔 |
40ul/孔 |
2 mL/孔 |
2 mL/孔 |
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12孔板（1管 / 4孔） |
4.5 cm2/孔 |
15ul/孔 |
1 mL/孔 |
1 mL/孔 |
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24孔板（1管 / 8孔） |
8 cm2/孔 |
8ul/孔 |
0.5 mL/孔 |
0.5 mL/孔 |
表1：hESC/iPSC传代&培养操作试剂推荐用量
Ø 4、冻存hESC/iPSC（以6孔板为例）
1. 当细胞汇合度达85%左右可收获冻存，一般6孔板每孔可冻存2管。
2. 准备相应数量的1.5/2 mL冻存管，标记细胞名称、代次（P# ）、日期、操作人。
3. 取出4℃冰箱中的StemFreez Alive Solution干细胞冻存液 ，置于室温预温，使用前注意摇匀。
4. 吸取上清液，加入2 mL / 孔的DPBS（不含钙镁），轻轻摇晃数次，再吸弃。
5. 加入2 mL/孔的StemGrowth series消化液，将细胞置于37℃培养箱中，计时5-7 min（可参考“3、传代hESC/iPSC”步骤）。
6. 消化结束，轻轻取出培养板，吸取StemGrowth series消化液。
7. 摇匀预温的StemFreez Alive Solution干细胞冻存液干，每孔加入1 mL冻存液，轻柔吹打3下，水平十字摇匀3次，随后吸取细胞悬液500ul加入1.5/2 mL冻存管中。
8. 将细胞置于梯度程序降温盒中，并置-80℃冰箱中过夜，次日转入液氮罐中长期保存。
更新日期：2025年03月18日
