Mouse Gastric Epithelial Organoid Kit Plus

小鼠胃上皮类器官培养基套装Plus

1、 产品描述

模基生物小鼠胃上皮类器官培养基套装Plus（Mouse Gastric Epithelial Organoid Kit Plus）是一种化学定义的细胞培养基，用于建立和维持成体干细胞来源的小鼠胃上皮类器官。胃上皮细胞的自我更新是由干细胞及其前体细胞的增殖驱动的。小鼠胃上皮类器官在结构、细胞类型组成和自我更新方面表现出了胃上皮的大部分特征。因此为研究小鼠胃上皮稳态和疾病提供了前所未有的希望。

2、 产品信息

3、 其他自备材料和试剂

4、 小鼠胃上皮类器官完全培养基使用说明

1、   收到类器官培养基后，将培养基置于4℃冰箱进行解冻；

2、   待培养基完全解冻后上下颠倒充分混匀，在生物安全柜或洁净工作台中根据日常需求量进行分装，推荐分装成10mL/管；

3、   分装后的培养基请密封后储存于-20℃，使用时取出分装的培养基放置室温平衡后即可使用。

5、 小鼠胃上皮类器官的建立和传代培养

1、   实验前先将基质胶放置4℃冰上解冻，同时取出培养基放置室温平衡。与细胞接触的离心管、试管或者塑料吸头需要用类器官培养防粘附润洗液润洗后使用。

2、   取样：小鼠断颈处死，表面喷洒酒精杀菌。在无菌条件下取出小鼠胃组织，放入4℃预冷的上皮类器官基础培养基或含双抗的DPBS中，清洗组织2次。

3、   清洗：将组织样本转移至装有预冷DPBS缓冲液的培养皿中，将胃组织纵向刨开腔面朝上，并刮去浆膜肌(实际有肉眼观察不到浆膜肌的具体位置，所以在内外表面刮去表面少量组织)，将组织置于新的含DPBS的培养皿中清洗，重复清洗2次。将清洗后的胃组织剪碎至2mm宽，转移至新的50mL离心管中，用15mL的DPBS上下剧烈摇晃10次，并重复清洗2-3次（直至上清澄清）。

4、   消化：将清洗好的肠段转移至含有10mM EDTA的20mL预冷DPBS中消化，置于室温孵育10-20min，消化20min左右即可终止消化。

5、   清洗：消化完成后，将组织碎片转移到新的含15mL DPBS的离心管中清洗，重复2次以去除EDTA。

6、   挤压：将沉淀收集到一个干净的10cm培养皿中加入3mL DPBS；用载玻片将腺体从组织中挤出(能够观察到白色组织被挤压到边缘)按压5-10次后并收集浑浊悬液，重复2次 。

7、   收集：收集组织悬液，300g离心力4℃离心3min。

8、   计数：弃上清，使用1mL0.1%BSA的DPBS重悬组织沉淀，取20μL悬液进行镜检和隐窝计数，计数完成后吸取包含所需腺体量的悬液，300g离心力4℃离心3min，弃上清后置于冰上。

9、   用适量的基质胶重悬组织沉淀，推荐重悬密度为每30μL基质胶悬液包含70个腺体，重悬后置于冰上，重悬时间不超过30s以避免基质胶过早凝固。

注意：基质胶稀释比例应在70%以上以保证培养过程中基质胶的结构稳定性。

10、 将基质胶和组织细胞的混合悬液点入24孔板底部正中央，每孔30μL左右，避免悬液接触孔板侧壁。。10.将接种完成后的培养板至于37℃二氧化碳恒温培养箱中，孵育30min左右待基质胶凝固。

11、 待基质胶完全凝固后，沿壁缓慢加入已配制好的人小肠类器官完全培养基，24孔板每孔500μL，避免破坏已凝固结构。

12、 将24孔板置于37℃二氧化碳培养箱中培养。

13、 每2~3天更换一次培养基，更换培养基时应避免破坏基质胶。密切监测类器官生长状态，理想情况下，人小肠类器官应在5至7天内建成。

a)小鼠胃上皮类器官的传代培养

1、   待类器官培养到直径为100~500μm大小时（或变黑不再增大时），即可进行类器官的传代（每代约1~2周）。以下操作与细胞接触的耗材均需用润洗液润洗后使用：

2、   吸弃旧培养基，加入等体积上皮类器官基础培养基，用细胞刮刀或者移液管吸头尖端轻轻刮下（或吹打）基质胶和类器官混合物，转移至1.5mL离心管中（每管最多收集2~3孔类器官，避免体积体积过大消化效率低），吹打5~10次，使类器官和基质胶分离，300g离心3分钟。

3、   去除上清液加入5倍于基质胶和类器官混合物体积的类器官消化液，吹打混匀后置于37℃培养箱中消化5~10分钟。取出吹打混匀，取10μL混合液镜检是否消化成小的细胞团块，消化不充分可适当延长消化时间。若要求细胞计数则需消化成单个细胞，可延长消化时间至10~20分钟后终止消化后台盼蓝染色进行细胞计数。密切监视消化过程使在类器官解离液中的孵育时间最短。

4、   消化完成后，加入5倍体积上皮类器官基础培养基吹打混匀以终止消化反应，然后250g离心3分钟。

5、   吸弃上清液，用上皮类器官基础培养基清洗2次以去除残留的消化液。最后一次清洗可将类器官合并收集在同一个离心管中。

6、   清洗完成后将离心沉淀中的细胞进行传代培养，在细胞沉淀中加入基质胶（>70%）并在冰上混匀（注意，混匀吹打的动作要轻柔，切忌产生大量气泡，常温混匀则需要控制在15秒内），混匀后置于冰上。注意：基质胶稀释比例应在70%以上以保证培养过程中基质胶的结构稳定性。

7、   将基质胶和细胞的混合悬液点入培养孔板底部正中央，使用枪头稍微摊平悬液，注意避免悬液接触孔板侧壁。（推荐：96孔板接种3~10μL/孔，48孔板接种10~20μL/孔，24孔板接种20~30μL/孔）。注意：为防止基质胶室温凝固，此步骤应尽快完成。

8、   将培养板放入37℃和5%CO₂的培养箱中15-25分钟，让基质胶凝固。

9、   待基质胶完全凝固后，沿壁缓慢加入室温平衡的类器官完全培养基，避免破坏已凝固结构。（推荐：96孔板加入100μL/孔，48孔板加入250μL/孔，24孔板加入500μL/孔）。注：不要将培养基直接添加到基质胶液滴的顶部，因为这可能会破坏已凝固结构。

10、 将培养板置于37℃和5%CO₂的恒温培养箱中。

11、 每隔2~3天更换一次培养基，小心地从孔中吸出培养基，并加入新鲜的室温平衡的类器官完全培养基。

12、 密切监测类器官生长状态，直到类器官需要进行下一步实验

V2.1版

更新时间：2025/07/29